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基因芯片的基本原理

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基因芯片又稱DNA芯片、DNA微陣列,包括寡核苷酸微陣列和cDNA微陣列,是指采用原位合成或顯微打印手段,將數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA片段按預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式固化在載體面,并以此作為探針,產(chǎn)生二維DNA探針陣列,在一定的條件下,與樣品中待檢測(cè)的靶基因片段雜交,通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào),實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的存在、含量及變異等信息的快速檢測(cè)。由于常用硅芯片作為固相扶持物且在制備過(guò)程中運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù),所以稱為基因芯片技術(shù)

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基因芯片技術(shù)的基本原理

基因芯片的基本原理是利用雜交的原理,即DNA根據(jù)堿基配對(duì)原則,在常溫下和中性條件下形成雙鏈DNA分子,但在高溫、堿性或有機(jī)溶劑等條件下,雙螺旋之間的氫鍵斷裂,雙螺旋解開,形成單鏈分子(稱為DNA變性,DNA變性時(shí)的溫度稱丁m值)。

變性的DNA黏度下降,沉降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加。當(dāng)消除變性條件后,變性DNA兩條互補(bǔ)鏈可以重新結(jié)合,恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu),這一過(guò)程稱為復(fù)性。復(fù)性后的DNA,其理化性質(zhì)能得到恢復(fù)。

利用DNA這一重要理化特性,將兩個(gè)以上不同來(lái)源的多核苷酸鏈之間由于互補(bǔ)性而使它們?cè)趶?fù)性過(guò)程中形成異源雜合分子的過(guò)程稱為雜交(hybridization)。

雜交體中的分子不是來(lái)自同一個(gè)二聚體分子。由于溫度比其他變性方法更容易控制,當(dāng)雙鏈的核酸在高于其變性溫度(Tm值)時(shí),解螺旋成單鏈分子;當(dāng)溫度降到低于Tm值時(shí),單鏈分子根據(jù)堿基的配對(duì)原則再度復(fù)性成雙鏈分子。因此通常利用溫度的變化使DNA在變性和復(fù)性的過(guò)程中進(jìn)行核酸雜交。

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